l 本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關(guān)液體樣本中小鼠半胱氨酸蛋白酶8（Casp-8）的含量。

l 有效期：6個(gè)月

l 保存條件：2-8℃

l 本試劑盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷

實(shí)驗原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被小鼠半胱氨酸蛋白酶8（Casp-8）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過(guò)溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠半胱氨酸蛋白酶8（Casp-8）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長(cháng)下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

操作說(shuō)明

1．試劑盒保存：-20℃(較長(cháng)時(shí)間不用時(shí))；2-8℃(頻繁使用時(shí))。

2．濃洗滌液低溫保存會(huì )有鹽析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶。

3．中、英文說(shuō)明書(shū)可能會(huì )有不一致之處，請以英文說(shuō)明書(shū)為準。

4．剛開(kāi)啟的酶聯(lián)板孔中可能會(huì )含有少許水樣物質(zhì)，此為正�，F象，不會(huì )對實(shí)驗結果造成任何影響。

試劑盒組成

標本要求 

1．標本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻進(jìn)行，提取后應盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

標準品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰�倍標準品一支，用�?hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品*終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

溫育：操作同3。

洗滌：操作同5。

顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時(shí)藍色立轉黃色）。

測定：以空白空調零，450nm波長(cháng)依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以?xún)冗M(jìn)行。

標本處理

1、 只對試劑盒本身負責，不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負責，請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量，預留充足的樣本。

2、 實(shí)驗前應預測標本含量，如果標本濃度過(guò)高，應對標本進(jìn)行稀釋?zhuān)�使稀釋后的標本符合試劑盒的檢測范圍，計算時(shí)再乘以相應的稀釋倍數。

3、 若所檢樣本不包含在說(shuō)明書(shū)所列樣本之中，建議進(jìn)行預實(shí)驗驗證其有效性，并注意留存樣本。

4、 使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細胞提取液可能會(huì )由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導致  ELISA實(shí)驗結果偏差。

5、 若樣本為細胞培養上清，因該類(lèi)樣本干擾因素 較多，如：細胞狀態(tài)、細胞數量、采樣時(shí)間等，所以可能存在檢測不出的情況。

6、 某些天然蛋白或重組蛋白，包括原核及真核重組蛋白，可能因為與本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配，而不被檢測出。

7、 建議使用新鮮樣本，保存時(shí)間過(guò)長(cháng)可能會(huì )存在蛋白降解或變性導致實(shí)驗結果偏差。

更新時(shí)間：2024/6/24 9:31:50