規 格 （48T/96T）
樣品類(lèi)型 血清、血漿、細胞培養上清等樣品類(lèi)型
檢測方法 酶聯(lián)免疫法，ELISA法
交叉反應 由于當前的酶聯(lián)免疫科學(xué)技術(shù)和知識有限，現有技術(shù)不可能完成藥物檢測的靶抗原之間和所有其他物種的類(lèi)似物。因此，交叉反應可能仍然存在
樣 本 量 50-100 μL
實(shí)驗時(shí)間 1–4.5h
儲存條件 2-8°C
儲存方法 可以存儲在2 - 8°C長(cháng)達1個(gè)月（專(zhuān)家建議：4°C恒溫保存，酶免試劑盒實(shí)驗效果更佳）。對于長(cháng)期存儲,請在-20°C的存儲。盡量保持試驗板在密封鋁箔袋，避免潮濕
有 效 期 6 months
工作原理
ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測定時(shí)，受檢標本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質(zhì)分開(kāi)。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過(guò)反應而結合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應的結果，使測定方法達到很高的敏感度。 類(lèi)型
ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。在這種測定方法中有三個(gè)必要的試劑：（1）固相的抗菌素原或抗體，即"免疫吸附劑"（immunosorbent）；（2）酶標記的抗原或抗體，稱(chēng)為"結合物"（conjugate）；（3）酶反應的底物。根據試劑的來(lái)源和標本的情況以及檢測的具體條件，可設計出各種不同類(lèi)型的檢測方法。用于臨床檢驗的ELISA主要有以下幾種類(lèi)型：
雙抗體夾心法測抗原
雙抗體夾心法是檢測抗原*常用的方法，操作步驟如下：
1） 將特異性抗體與固相載體聯(lián)結，形成固相抗體。洗滌除去未結合的抗體及雜質(zhì)。
2） 加受檢標本，保溫反應。標本中的抗原與固相抗體結合，形成固相抗原抗體復合物。洗滌除去其他未結合物質(zhì)。
3） 加酶標抗體，保溫反應。固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。徹底洗滌未結合的酶標抗體。此時(shí)固相載體上帶有的酶量與標本中受檢抗原的量相關(guān)。
4） 加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。通過(guò)比色，測知標本中抗原的量。在臨床檢驗中，此法適用于檢驗各種蛋白質(zhì)等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要獲得針對受檢抗原的異性抗體，就可用于包被固相載體和制備酶結合物而建立此法。如抗體的來(lái)源為抗血清，包被和酶標用的抗體分別取自不同種屬的動(dòng)物。如應用單克隆抗體，一般選擇兩個(gè)針對抗原上不同決定簇的單抗，分別用于包被固相載體和制備酶結合物。這種雙位點(diǎn)夾心法具有很高的特異性，而且可以將受檢標本和酶標抗體一起保溫反應，作一步檢測。
在一步法測定中，當標本中受檢抗原的含量很高時(shí)，過(guò)量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結合，而不再形成"夾心復合物"。類(lèi)同于沉淀反應中抗原過(guò)剩的后帶現象，此時(shí)反應后顯色的吸光值（位于抗原過(guò)剩帶上）與標準曲線(xiàn)（位于抗體過(guò)剩帶上）某一抗原濃度的吸光值相同（參見(jiàn)1.3.2，圖1-4），如按常法測讀，所得結果將低于實(shí)際的含量，這種現象被稱(chēng)為鉤狀效應（hook effect），因為標準曲線(xiàn)到達高峰后呈鉤狀彎落。鉤狀效應嚴重時(shí)，反應甚至可不顯色而出現假陰性結果。因此在使用一步法試劑測定標本中含量可異常增高的物質(zhì)（例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等）時(shí)，應注意可測范圍的值。用高親和力的單克隆抗體制備此類(lèi)試劑可削弱鉤狀效應。
假使在被測分子的不同位點(diǎn)上含有多個(gè)相同的決定簇，例如HBsAg的a決定簇，也可用針對此決定的同一單抗分別包被固相和制備酶結合物。但在HBsAg的檢測中應注意亞型問(wèn)題，HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4個(gè)亞型，雖然每種亞型均有相同的a決定簇的反應性，這也是用單抗作夾心法應注意的問(wèn)題。
雙抗體夾心法測抗原的另一注意點(diǎn)是類(lèi)風(fēng)濕因子（RF）的干擾。RF是一種自身抗體，多為IgM型，能和多種動(dòng)物IgG的Fc段結合。用作雙抗體夾心法檢測的血清標本中如含有RF，它可充當抗原成份，同時(shí)與固相抗體和酶標抗體結合，表現出假陽(yáng)性反應。采用F（ab＇）或Fab片段作酶結合物的試劑，由于去除了Fc段，從而消除RF的干擾。雙抗體夾心法ELISA試劑是否受RF的影響，已被列為這類(lèi)試劑的一項考核指標。
雙抗體夾心法適用于測定二價(jià)或二價(jià)以上的大分子抗原，但不適用于測定半抗原及小分子單價(jià)抗原，因其不能形成兩位點(diǎn)夾心。
樣品要求
·客戶(hù)需提供待檢測抗體和包被用抗原。
·檢測的樣本為細胞培養上清、人和動(dòng)物的血清、血漿。
·樣本收集后應立即-20℃保存，若長(cháng)期保存應-70℃。
·樣本量的要求：若一個(gè)指標做復孔檢測應不少于250ul，做單孔檢測應不少于120ul。建 議若客戶(hù)樣本量充足提供500ul以上。
·客戶(hù)的樣本收集后，立即按要求保存，切忌反復凍融。外地客戶(hù)郵寄需要用干冰運輸。郵寄前請與技術(shù)支持溝通確認。
更新時(shí)間：2024/6/24 9:32:01
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